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半纖維素是一種由幾種不同類型單糖構(gòu)成的異質(zhì)多聚體,它是植物細(xì)胞壁中和纖維素共生,易溶于酸堿的植物多糖。這些糖可能是五碳糖,也可能是六碳糖,其中包括木糖、阿拉伯糖、半乳糖等。半纖維素結(jié)合在纖維素微纖維的表面,而且相互連接,構(gòu)成了剪映的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。構(gòu)成半纖維素的糖基主要有D-木糖基,D-甘露糖基,D-葡萄糖基等等。半纖維素的結(jié)構(gòu)介于纖維素和多糖之間,決定了細(xì)胞壁的機(jī)械強(qiáng)度,增強(qiáng)植物對外界惡劣環(huán)境的抵抗能力。半纖維素在工業(yè)生產(chǎn)方面有廣泛的用途,比如造紙、食品等領(lǐng)域。
檢測半纖維素含量,比較快捷的方法就是DNS比色法。當(dāng)然,也有用到其他方法,比如碘量法、酶解法、色譜法等。根據(jù)實際需求,選擇最佳的、經(jīng)濟(jì)實惠的檢測方法。對物質(zhì)檢測的越深入,投入的精力和設(shè)備成本就會越高。隨著科技的發(fā)展,檢測方法也在不斷進(jìn)步,為了提供配液過程中出現(xiàn)的誤差,現(xiàn)在很多地方都用到了生化試劑盒的方法,只需要按照說明書的方法,取吸取對應(yīng)的試劑,進(jìn)行簡單的操作就能測定樣品中半纖維素的含量。
DNS法是一種檢測糖類含量的方法,其基本原理是:在酸性的條件下,半纖維中的糖類和DNS發(fā)生反應(yīng),生成紅色的化合物。這個顏色的深淺和糖含量的多少呈正相關(guān)的,通過比色的方法可以量化測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸光度,在對樣品在同樣的條件下測定。在靠譜的標(biāo)準(zhǔn)曲線的依據(jù)下,從樣品反應(yīng)產(chǎn)生化合物測定的吸光度反推,可以計算出半纖維素的含量。為了更加準(zhǔn)確,可以多測幾次,求取平均值。
操作步驟簡單,但還是要考驗實驗的基本功的。樣品處理是必須進(jìn)行的,它直接決定了樣品中能夠檢測出來的半纖維含量。處理的好,處理的徹底,檢測的含量就越準(zhǔn)確,結(jié)果就越接近實際。將植物樣品中的樣品烘干到恒重,增強(qiáng)檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。研磨成粉末,用蒸餾水浸泡過夜,離心去除殘渣,取上清液備用。稱取一定量的半纖維素標(biāo)準(zhǔn)品,用蒸餾水定容,制作出一些列的梯度濃度溶液。
將處理后的樣品,以及一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別放入到比色管中,加入適量的DNS試劑,開始反應(yīng)了哈?;靹蚝?,加入沸水浴中加熱2個小時,取出比色管,馬上放到冰水浴中冷卻,后,測定各自的吸光度值,當(dāng)然不能忘記了檢測空白對照。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的吸光度值,可以順利的計算出半纖維的含量。當(dāng)然,在實驗中有不太順利的地方,可以請教有經(jīng)驗的老師。