桔青霉素，又稱為橘霉素，是一種由霉菌產(chǎn)生的真菌毒素。它能夠污染玉米，大米等農(nóng)作物，對人和動物有一定的毒害作用。化學(xué)式為C13H14O5，分子量為250.247，溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、苯、正己烷等。主要用作微生物源殺蟲殺螨劑，用于果樹防治各種有害螨。對于食品添加劑，根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，桔青霉素的限量為0.04 mg/kg。

測定桔青霉素含量，主要方法包括酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法、氣相色譜（GC）法、高效液相色譜（HPLC）法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法等

這里以HPLC為例，簡單的介紹一下檢測的流程和方法。如果有需要檢測的，而且自身有設(shè)備和環(huán)境條件的，可以查詢一下相關(guān)的文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格按照操作步驟去完成。這里不僅考查的是樣品和桔青霉素的基本物理和化學(xué)性質(zhì)，還需要對儀器的各個部件及功能進(jìn)行充分的、系統(tǒng)的了解，達(dá)到熟練掌握的程度。因為，在后續(xù)的檢測過程中，需要通過驗證或開發(fā)色譜方法，不僅要從樣品出有效的分離出來，還要在檢測器中獲得相對理想的目標(biāo)色譜峰，便于準(zhǔn)確的計算出含量。

1.樣品處理

將樣品（如大米，辣椒，玉米等）充分的粉碎，研磨成粉，過篩。準(zhǔn)確的稱取10g到150ml的具塞錐形瓶中，這個時候向里面加入50ml的甲醇-水（70：30）的提取液。高速離心2min，過濾提取液。提取1ml濾液出來到另外的一個容器中，加入49ml的10mmol/L的磷酸溶液（pH7.5）稀釋，混勻，用玻璃纖維紙過濾，并進(jìn)行后續(xù)免疫親和柱凈化，待測。

2.色譜條件

采用C18的色譜柱，150mm，內(nèi)徑4.6um，粒徑5um，柱溫30℃；流動相A-乙腈，B-10mmol/L磷酸（pH2.5），梯度洗脫，流速為1ml/min。檢測器激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長500nm。進(jìn)樣量50ul，根據(jù)實際情況進(jìn)行驗證和調(diào)整。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制0.0ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL6個濃度的桔青霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液。在相對較好的色譜條件下，用配制好的這6個標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣,以相應(yīng)的桔青霉素的色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，以對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。

4.樣品測定和計算

將試樣溶液注入高效液相色譜儀，以上述的色譜條件，測定相應(yīng)的峰面積。由標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，可以計算出試樣溶液中桔青霉素的含量。