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柴胡皂苷a來源于北柴胡的干燥根,化學式為C42H68O13,分子量為780.982,它易溶于水、稀醇,不溶于苯、乙醚、氯仿等。研究表明,柴胡皂苷a具有多種生物活性,比如抗炎、抗病毒、抗癌、降血脂、保護肝臟等。它屬于β-香樹脂烷型五環(huán)三萜類化合物,苷元是齊墩果烷型,包括多個糖基和1個母核,也是一種天然的皂苷類化合物。藥理作用包括,通過抑制NF-κB通路減少炎癥因子(如TNF-α、IL-6)釋放,抑制TGF-β1的表達,保守神經等。
實驗室檢測柴胡皂苷a的含量,主要采用高效液相色譜(HPLC),參考中國藥典的方法。
1.樣品處理
將樣本進行粉碎處理,過4號篩,精密稱取0.5g,放在具塞錐形瓶中。加入5%的濃氨的甲醇溶液25ml,塞好塞子。在30℃的水浴中超聲(功率200W,頻率40kHz)處理30min,過濾。用甲醇20ml分2次洗滌容器和藥渣,將濾液合并,蒸干溶劑。殘渣用甲醇進行溶解,轉移到5ml容量瓶中,用甲醇定容到刻度,搖勻,過濾,待測。
2.色譜條件
C18色譜柱,250mm長,4.6mm內徑,5um粒徑;柱溫30℃。以乙腈為流動相A,超純水為流動相B,梯度洗脫,流速1ml/min。紫外檢測器,波長210nm,進樣量10-20uL。
3.標準曲線
精密稱量柴胡皂苷a的標準品,制成0.4mg/mL的溶液。并進行梯度稀釋6個濃度點,確保低點的濃度在檢測限的有效范圍內,并記錄各個標準溶液濃度值。依次進樣到HPLC,測出各個色譜峰,記錄色譜峰的保留時間,對色譜峰面積進行積分,對應到標準溶液的濃度,可以繪制出標準曲線,得到回歸方程,相關系數r2>0.999。
4.含量計算
將制備好的樣品溶液,進樣到HPLC,和標準曲線實驗相同的色譜條件。通過保留時間,可以識別出目標色譜峰。對色譜峰面積進行積分,代入到回歸方程,可以計算出樣品中的柴胡皂苷a的含量。