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黃芪皂苷測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2025-05-13 | 54 次瀏覽 | 分享到:
黃芪皂苷是從中藥材黃芪中提取出來的一種活性成分,具有多種藥理作用,比如增強(qiáng)免疫力,抗疲勞,抗氧化,抗炎等。黃芪皂苷的主要是由糖苷和皂苷兩部分組成,其中糖苷包括葡萄糖,鼠李糖等,皂苷部分包括甾體或三萜類化合物。目前從黃芪中分離出來的皂苷有很多種,主要有黃芪皂苷I,II,III,IV等。黃芪皂苷在植物中的含量比較低,在實(shí)驗(yàn)室檢測過程中一般會采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)等方法測定含量。

黃芪皂苷是從中藥材黃芪中提取出來的一種活性成分,具有多種藥理作用,比如增強(qiáng)免疫力,抗疲勞,抗氧化,抗炎等。黃芪皂苷的主要是由糖苷和皂苷兩部分組成,其中糖苷包括葡萄糖,鼠李糖等,皂苷部分包括甾體或三萜類化合物。目前從黃芪中分離出來的皂苷有很多種,主要有黃芪皂苷I,II,III,IV等。黃芪皂苷在植物中的含量比較低,在實(shí)驗(yàn)室檢測過程中一般會采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)等方法測定含量。


1.樣品處理


通過70%的甲醇進(jìn)行回流提取,水飽和正丁醇萃取黃芪中的皂苷成分。



2.色譜條件


采用C18的色譜柱,250mmx4.6mm,5um,柱溫25-30℃;以乙腈和水,或0.3%甲酸和乙腈,梯度洗脫,流速為1.0ml/min,進(jìn)樣量10-20uL。下面就是檢測器了,我看有不同種類的檢測器。有的用示差檢測器(RID),也有蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD),還有質(zhì)譜檢測器(MS)。



3.標(biāo)準(zhǔn)曲線


計(jì)算含量,用外標(biāo)法的話就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用黃芪皂苷的一種類型的標(biāo)準(zhǔn)品,用有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解和稀釋,通常是采用流動相中的有機(jī)溶劑。這樣的話,標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)入到流動相中就不會發(fā)生突然的變化,從而導(dǎo)致色譜峰出現(xiàn)不規(guī)則。對每個參數(shù)的調(diào)整,都需要開發(fā)或驗(yàn)證,從而確定最佳的色譜條件,獲得相對準(zhǔn)確的有效的色譜峰。梯度稀釋,形成5-7個濃度點(diǎn),進(jìn)樣到HPLC中,測定出對應(yīng)的色譜峰。當(dāng)然,如果是質(zhì)譜,就是被打碎的具有質(zhì)荷比(m/z)的離子峰。對峰面積進(jìn)行積分,在表格中對應(yīng)到它的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,可以繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)需要大于0.999。


4.含量計(jì)算


標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)走過一遍了,現(xiàn)在可以上機(jī)測樣品溶液。樣品出來的峰可能會比較多,并沒有標(biāo)品那么純凈。但是,根據(jù)色譜柱的特點(diǎn),在標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖中找到它的保留時間,就能對應(yīng)的分析出來樣品色譜圖中的位置,識別出目標(biāo)峰。對峰面積進(jìn)行手動或自動積分,代入到回歸方程,計(jì)算出對應(yīng)黃芪皂苷的含量。


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