維生素D是一種脂溶性的維生素，主要有D2（麥角鈣化醇）和D3（膽鈣化醇）兩種形式，它們的結(jié)構(gòu)很相似，只是側(cè)鏈有差別。維生素D是一種環(huán)戊烷多氫菲類化合物，可促進(jìn)小腸黏膜細(xì)胞對(duì)鈣和磷的吸收，促進(jìn)鈣鹽的更新和新骨的生成，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長分化和免疫功能。維生素D主要通過陽光照射和食物攝取等方法獲得，其中紫外線B可激活皮膚中的膽固醇轉(zhuǎn)化為維生素D。植物中的維生素D含量比較低，而大多數(shù)是存在海鮮類、奶類、動(dòng)物肝臟、雞蛋等食物中。

檢測(cè)方法：高效液相色譜（HPLC）或液相色譜質(zhì)譜（LC-MS）。以HPLC為例，簡(jiǎn)單的介紹一下檢測(cè)流程和方法。如果要測(cè)的話，需要咨詢有經(jīng)驗(yàn)的老師或查閱權(quán)威的文獻(xiàn)資料。

1.樣品提取

稱取樣品2g放到5ml棕色離心管內(nèi)，加入2ml乙醇。勻漿200s，轉(zhuǎn)移到50ml棕色離心管，再加入皂化試劑，充分振蕩1min。在85℃的水浴中避光30min，反應(yīng)結(jié)束后取出來放冷到室溫。弄出來后，加入15ml的石油醚試劑，混合1min，靜置15min。重新萃取2次，合并到一起。用水洗滌到中性，加入1g的無水硫酸鈉，取上清液，室溫吹干。加0.5ml的乙醇溶解，0.22um膜過濾，待測(cè)。

2.色譜條件

可以用VWD或DAD的檢測(cè)器，波長設(shè)置為265nm。C18的色譜柱，250mm長，4.6mm內(nèi)徑，5um粒徑。柱溫的話，一般設(shè)置為30℃差不多了。就考慮流動(dòng)相了，流動(dòng)相用100%的甲醇，等度洗脫，相對(duì)比較簡(jiǎn)單，但是要脫氣或色譜級(jí)別的。流速為1ml/min，進(jìn)樣量10-20uL，根據(jù)實(shí)際的出峰情況進(jìn)行調(diào)整。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱取維生素D的標(biāo)準(zhǔn)品于5mL棕色容量瓶中，然后加入適量甲醇超聲溶解，用甲醇定容至刻度線，搖勻、使之成為1mg/mL的儲(chǔ)備液。稀釋成200ug/mL，100ug/mL，50ug/mL，20ug/mL，10ug/mL，2ug/mL的梯度濃度。依次進(jìn)樣到HPLC，記錄出峰的保留時(shí)間，對(duì)各個(gè)峰的峰面積進(jìn)行積分處理，對(duì)應(yīng)到峰的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。

4.含量計(jì)算

將樣品溶液進(jìn)到HPLC中，或自動(dòng)進(jìn)樣，或手動(dòng)進(jìn)樣，看出峰的情況。根據(jù)保留時(shí)間，可以識(shí)別出樣品維生素D的色譜峰，對(duì)峰面積進(jìn)行積分，并代入到回歸方程，就可計(jì)算出樣品溶液中的維生素D含量。