天冬酰胺主要來源于植物，比如羽扇豆、大豆以及豆芽的水提取物中。通過氨基酸的酰胺反應(yīng)，也可以通過人工的方式合成天冬酰胺。L-天冬酰胺是一種天然存在的化合物，化學(xué)式為C4H8N2O3，分子量為132.12，是生物體內(nèi)常見的20種氨基酸之一。天冬酰胺是由4個碳原子組成的，側(cè)鏈為酰胺基，和天冬氨酸相比少一個羧基（COOH）。它是蛋白質(zhì)的基本組成單元之一，穩(wěn)定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，參與氮代謝和能量供應(yīng)，是神經(jīng)遞質(zhì)的前體，可提高免疫細(xì)胞活性，具有抗氧化等作用。

檢測樣品中的天冬酰胺含量的方法，一般包括高效液相色譜（HPLC），液相質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS），酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法等。這里以HPLC為例，簡單的介紹一下檢測流程。

1.樣品處理

這個步驟包括了水解和衍生兩個過程。水解就是將樣品中的目標(biāo)化合物溶解到溶劑中，比如稱取0.1g的樣本，加入1ml的6mol/L的鹽酸，振蕩5min。之后，放到105℃的烘箱中水解24h。水解結(jié)束后，冷卻到室溫，用鹽酸補充丟失的部分。加入1ml的6mol/L的NaOH溶液，振蕩5min中和到中性，在4000r/min的離心10min，取0.5ml出來進行衍生。

衍生的過程，就是將取出來的0.5ml的樣本溶液，加入pH=9.0 碳酸氫鈉緩沖溶液和DNFB各0.5ml，放入60±0.5℃水浴中，避光反應(yīng)60min。取出立即用冷水冷卻至室溫，加入3.5ml pH=7.0磷酸緩沖溶液，充分混勻，室溫避光反應(yīng)15min，取上清液過0.22μm 濾膜，待液相色譜測定。 

2.色譜條件

用C18的色譜柱，250mm長，4.6mm內(nèi)徑，5um的粒徑；柱溫設(shè)置為38℃。用VWD檢測器，波長360nm。以A:乙腈:甲醇=90:10  B:0.02mol/L磷酸二氫鈉+磷酸氫二鈉為流動相，梯度洗脫。流速1ml/min，進樣量10uL。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

稱取少量的標(biāo)準(zhǔn)品，溶于甲醇中，制備成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)母液。梯度稀釋6個濃度點，并進樣到HPLC中，測出各個濃度的色譜峰。對峰的面積進行積分，結(jié)合它的濃度，在表格中可以擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。相關(guān)系數(shù)r2要大于0.999，并接近于1。重復(fù)性RSD≤2%，有的時候要考慮回收率。

4.含量計算

將樣品溶液進到HPLC，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間，找到目標(biāo)化合物的峰。對色譜峰面積進行積分，代入到回歸方程，就可以計算出樣品溶液中的天冬酰胺的含量。