次黃嘌呤核苷酸（IMP）是生物體內(nèi)的一種嘌呤核苷酸，是由次黃嘌呤、核糖和磷酸基團(tuán)組成的。在體內(nèi)起著重要的作用，如核酸合成、能量傳遞、細(xì)胞信號(hào)調(diào)控等。次黃嘌呤核苷酸（IMP）是腺嘌呤核苷酸（AMP）和鳥嘌呤核苷酸（GMP）的共同前體，IMP是經(jīng)過(guò)磷酸戊糖途徑和多步的酶促反應(yīng)而合成的，可被水解為次黃苷和磷酸，進(jìn)一步分解為尿酸排出體外。

檢測(cè)方法：高效液相色譜（HPLC）或液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）。

1.樣品處理

精確稱取0.2000g樣品，放入2mL 離心管，再加 1mL 2.5%高氯酸水溶液，放置振蕩器混勻 1min，低溫超聲20min，13000r/min 離心 20min，取上清液過(guò) 0.45μm濾膜，待液相色譜測(cè)定。

2.色譜條件

C18色譜柱，250mm長(zhǎng)，4.6mm內(nèi)徑，5um粒徑，柱溫30℃；以甲醇-水（2:98）為流動(dòng)相，等度洗脫，流速1ml/min。紫外檢測(cè)器，波長(zhǎng)254nm。進(jìn)樣量10uL。有的用的色譜柱不一樣，對(duì)應(yīng)的流動(dòng)相也會(huì)有所差別。比如，用ODS-100V（250*4.6mm，5μm）的色譜柱，0.035mol/L 磷酸二氫鈉（pH=6.8）等度洗脫。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

將次黃嘌呤核苷酸（IMP）的標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解，配制成標(biāo)準(zhǔn)母液。并進(jìn)行一系列的梯度稀釋，比如0.5mg/L，1.5mg/L，10mg/L，50mg/L，100mg/L，盡可能的覆蓋到樣品溶液的濃度范圍。進(jìn)樣到HPLC中，測(cè)出色譜峰，記錄峰的保留時(shí)間，對(duì)峰面積進(jìn)行積分。在表格中用趨勢(shì)圖可擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)r2要大于0.999并接近于1。有的需要加標(biāo)回收率，穩(wěn)定性等考慮。

4.含量計(jì)算

有了標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)測(cè)定樣品溶液的色譜峰，保留時(shí)間能識(shí)別出色譜峰，并對(duì)面積進(jìn)行積分，代入到回歸方程，可計(jì)算出樣品溶液中的IMP的含量。