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植物白頭翁是一種傳統(tǒng)的中藥材,始載于《神農本草經》,性寒,具有清熱解毒的作用。白頭翁皂苷主要包括B4和A3兩種,主要來源于毛茛科植物白頭翁。在藥理應用方面,主要有抗菌抗炎,神經保護,增強免疫力等。白頭翁皂苷 A3的化學式為C41H66O12,分子量為750.956,可溶于甲醇,乙腈,乙醇等溶劑,不溶于石油醚。白頭翁皂苷B4來源于干燥的根,它的化學式為C59H96O26,分子量為1221.38,可溶于甲醇,乙醇,DMSO等有機溶劑。
科研方面,檢測白頭翁皂苷含量,一般采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質譜聯(lián)用(LC-MS)等。以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測流程。
1.樣品處理
一般采用有機溶劑提取法,如粉碎過篩后,加入適量的甲醇,超聲處理,讓皂苷充分的溶解出來。然后,冷卻,過濾,得到含有機溶劑的皂苷。根據(jù)相關的標準或操作步驟,可以獲得相對詳細的操作步驟和參數(shù)。在有相關設備,溶劑,技術的前體下,無死角地完成操作。有的時候,需要對粗提液進一步的純化,比如用大孔樹脂等。
2.色譜條件
舉例,采用C18的色譜柱,長250mm,內徑4.6um,粒徑5um;柱溫30-40℃。流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(29:71) ,也有甲醇和水(80:20)的流動相,流速為0.8-1.0ml/min,進樣量10-20uL。檢測器的話,有用到紫外檢測器,二極管陣列檢測器,質譜檢測器等。質譜檢測器,是在流動相分離提取的基礎上,實現(xiàn)對化合物的離子碎片化,確認化合物的分子量和化學結構,能夠更準確的計算出含量。
3.標準曲線
精密稱量白頭翁皂苷B4或A3對照品,加入甲醇,制成0.1mg/mL的溶液。成倍的,梯度稀釋6個濃度點,確保在檢測器的有效范圍內。進樣,測定色譜峰,對面積進行積分,對應各個標準溶液濃度,繪制標準曲線,得到回歸方程。
4.含量計算
和標準曲線相同的色譜條件,進樣到HPLC,測出色譜峰,根據(jù)保留時間確定目標化合物。對色譜峰面積進行積分,結合回歸方程,可以計算出樣品中的白頭翁皂苷含量。