環(huán)二鳥苷酸（c-di-GMP）是由鳥苷三磷酸在二鳥苷酸環(huán)化酶的作用下環(huán)化而形成的，這個反應的過程還需要有Mg2+作為輔助因子，以確保反應酶的活性。c-di-GMP作為細菌中的第二信使分子，參與調(diào)節(jié)多種生理功能，比如細胞分化，生物被膜形成，致病因子產(chǎn)生等。它的作用機制是通過二鳥苷環(huán)化酶（DGC）合成和磷酸二酯酶（PDE）的降解途徑進行調(diào)控的。c-di-GMP的化學式為C20H24N10O14P2，分子量為690.41。

檢測方法：高效液相色譜（HPLC）法，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS），酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法等。以HPLC為例，簡單的介紹一下檢測流程。

1.樣品處理

根據(jù)樣品中種類，如血清，血漿，細胞上清，組織勻漿等。采用不同的方法，去除雜質(zhì)，超聲，離心，膜過濾，待測。具體操作過程和方法，需參考相關的標準、文獻或開發(fā)出來。

2.色譜條件

常規(guī)的C18反相色譜柱，250mmx4.6mm，5um，柱溫25℃；紫外檢測器，波長253nm；以乙酸銨和乙酸銨甲醇為流動相，梯度洗脫，流速0.8-1ml/min，進樣量10-20uL。僅供參考，需要重新驗證或調(diào)整參數(shù)，獲得適合實際環(huán)境情況的最佳條件。

3.標準曲線

將c-di-GMP的標準品用水進行溶解和稀釋，配制成標準母液，記錄它的濃度值。然后，梯度稀釋5-7個點，可以成倍的進行，確保覆蓋到樣品溶液中的目標化合物可能濃度范圍。最低點一般是在定量限，以信噪比（S/N）的10倍確定。依次進樣到HPLC中，測出各個點的色譜峰，記錄它的保留時間。對各個峰的峰面積進行積分處理，并結(jié)合它的濃度，擬合出標準曲線，得到回歸方程。

4.含量計算

樣品溶液進樣到HPLC中，在軟件中記錄色譜峰。由于樣品是復雜的，沒有標品那么純正，因為可能會出現(xiàn)雜峰。根據(jù)標準色譜峰的保留時間，找到樣品中目標色譜峰的位置，并對它的峰面積進行手工或自動積分處理。將樣品的c-di-GMP的色譜峰面積代入到回歸方程，可計算出樣品溶液中的c-di-GMP的含量。