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楊梅素,又稱為楊梅樹皮素,是一種黃酮醇類化合物。它廣泛的存在植物中,主要是從藤茶莖葉中或楊梅樹皮中提取出來的。楊梅素具有廣泛的藥理活性,比如抗氧化,清除自由基,調(diào)節(jié)免疫力等作用。溶于甲醇、乙醇和丙酮,微溶于乙酸乙酯,不溶于水、石油醚 、氯仿、甲苯和正己烷??构饨饽芰Σ?,在酸性條件下較穩(wěn)定,而偏中性及堿性環(huán)境中易被破壞。
檢測方法:高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)。以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測流程。
1.樣品前處理
精確稱取約0.2g研磨的試樣于15mL離心管,加入5mL的80%甲醇水,放置振蕩器充分振蕩混勻1min,室溫超聲30min,結(jié)束后4000r/min離心10min,轉(zhuǎn)移上清液于新的離心管中,向殘?jiān)屑尤?mL的80%甲醇水,重復(fù)上述操作一次,合并兩次上清液,氮吹至2mL,混勻,取上清液過0.22μm濾膜,待液相色譜測定。
2.色譜條件
C18的色譜柱,250mm長,4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;柱溫30℃。DAD檢測器,波長280nm。以0.1%磷酸水和甲醇為流動(dòng)相,梯度洗脫,流速0.8-1ml/min。進(jìn)樣量10-20uL,僅供參考。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
將楊梅素標(biāo)準(zhǔn)品放入5mL棕色容量瓶中,適量甲醇超聲溶解后用甲醇定容至刻度線,搖勻、使之成為1mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液,-20℃保存。用80%甲醇水梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),盡可能的覆蓋到樣品溶液的濃度范圍。進(jìn)樣到HPLC中,測出標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰,記錄保留時(shí)間,對(duì)峰面積進(jìn)行積分處理。每個(gè)峰面積對(duì)應(yīng)它的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,可擬合出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品含量計(jì)算
將樣品溶液注入到HPLC,測出色譜峰圖。根據(jù)保留時(shí)間,找到目標(biāo)色譜峰。對(duì)它的峰面積進(jìn)行積分,并代入到回歸方程,就可以計(jì)算出樣品溶液的楊梅素含量。